隨著醫療事業的快(kuài)速發展，PCR試(shì)劑(jì)，熒光PCR試劑(jì)等(děng)的凍(dòng)幹迅速(sù)崛起。很多(duō)企業(yè)在(zài)開發PCR試劑的凍(dòng)幹。PCR試劑(jì)的凍幹就(jiù)是(shì)配製的液態PCR檢測(cè)體係添(tiān)加凍(dòng)幹(gān)保(bǎo)護(hù)劑(jì)（包括賦(fù)形(xíng)劑）後(hòu)，先(xiān)預(yù)先凍(dòng)結為(wéi)固(gù)體(tǐ)，在真空(kōng)條件(jiàn)下，利用(yòng)物質(zhì)的(dí)升(shēng)華，使(shǐ)物料低(dī)溫脫(tuō)水而達到(dào)試劑幹燥的目的。在冷凍幹燥過程(chéng)中(zhōng)熱(rè)敏(mǐn)性物質(zhì)（如酶，dntp等）不會(huì)發(fā)生(shēng)變(biàn)性或(huò)失活(huó)，能(néng)保(bǎo)持原來(lái)的活(huó)性(xìng)；凍(dòng)幹(gān)前後試(shì)劑體積變化(huà)很(hěn)小，保持(chí)了原來(lái)的結(jié)構(gòu)；幹燥過程在真(zhēn)空下(xià)進行(háng)，氧(yǎng)氣極(jí)少(shǎo)，易(yì)氧(yǎng)化的物質能(néng)夠得到(dào)保(bǎo)護(hù)；冷(lěng)凍幹燥(zào)能(néng)排除95％～99％以上(shàng)的(dí)水分(fēn)，使幹燥(zào)後產品能長期保(bǎo)存(cún)而不致(zhì)變(biàn)質(zhì)。冷凍幹(gān)燥整個幹(gān)燥過程在(zài)低(dī)溫中進行，PCR試劑(jì)活(huó)性不(bù)會(huì)受(shòu)到影(yǐng)響。因此(cǐ)與常規(guī)液態PCR試(shì)劑(jì)相比(bǐ)凍幹試(shì)劑有著常(cháng)溫穩(wěn)定(dìng)，擺脫冷鏈(liàn)，即(jí)時(shí)活(huó)化，不相容試劑共存，無交(jiāo)叉汙(wū)染等很多明顯優勢。
所(suǒ)有的凍(dòng)幹包括藥(yào)物(wù)的(dí)凍(dòng)幹和(hé)試劑(jì)的(dí)凍(dòng)幹，原理(lǐ)都是(shì)一(yī)樣(yàng)的，都(dū)是在(zài)含(hán)有(yǒu)保護劑(jì)的情況下(xià)，將我們要保護的試劑(jì)或(huò)者(zhě)物(wù)質(zhì)進行(háng)凍幹(gān)。其中(zhōng)凍幹(gān)保護(hù)劑起(qǐ)了(liǎo)很大(dà)的作(zuò)用，如果(guǒ)沒(méi)有凍幹保(bǎo)護劑的添加，很(hěn)多(duō)物(wù)質(zhì)是不能完(wán)好(hǎo)的凍幹的。凍幹保護劑使(shǐ)得(dé)本來不適合凍(dòng)幹的物(wù)質(zhì)能(néng)夠獲(huò)得良(liáng)好的凍幹狀態。常見的凍幹保護劑包括：糖類，醇類(lèi)，氨基(jī)酸(suān)類，聚合物(wù)類，表麵(miàn)活性劑類，鹽(yán)類(lèi)，大分子(zǐ)活(huó)性(xìng)物質(zhì)類等，這麼多的種(zhǒng)類應(yīng)該如(rú)何選擇(zé)呢？對(duì)於(yú)凍(dòng)幹保護劑的選擇不一定(dìng)，凍幹的(dí)曲綫不一樣，凍(dòng)幹(gān)的本體物質的(dí)濃度(dù)不一(yī)樣，反應體係不一樣(yàng)，所以(yǐ)終凍(dòng)幹(gān)的結果，凍幹的時間成(chéng)本等(děng)是不(bù)同的。而(ér)對於凍幹(gān)保(bǎo)護(hù)劑(jì)有(yǒu)些通用的(dí)常(cháng)用的物(wù)質(zhì)如海(hǎi)藻糖，蔗(zhè)糖，甘(gān)露(lòu)醇(chún)，PEG，pvp等(děng)。但是除(chú)了這些常(cháng)用(yòng)的(dí)還有很(hěn)多(duō)如(rú)甘(gān)油(yóu)，乳糖，半(bàn)乳糖，組(zǔ)氨酸(suān)，精氨酸，甘氨(ān)酸，右旋糖苷，吐溫(wēn)80，吐(tǔ)溫(wēn)100，環糊精，明(míng)膠(jiāo)，維生(shēng)素(sù)C，維生(shēng)素B，牛(niú)血清(qīng)，二硫(liú)蘇糖(táng)醇，吐溫(wēn)20，明(míng)膠(jiāo)等，這(zhè)些都(dū)是(shì)很好(hǎo)的凍幹(gān)保(bǎo)護(hù)劑或者(zhě)賦(fù)形劑(jì)。因此(cǐ)對於同一個試劑的凍幹可(kě)以(yǐ)選擇的凍(dòng)幹保(bǎo)護(hù)劑是很多(duō)的。
凍(dòng)幹保(bǎo)護(hù)劑的篩選(xuǎn)看(kàn)似簡單，但是需要(yào)大(dà)量的工作(zuò)量(liáng)，如果想(xiǎng)獲得一(yī)個(gè)高效穩(wěn)定(dìng)的(dí)PCR凍幹體係，需要進行(háng)大量的(dí)實(shí)驗，保護劑(jì)的篩(shāi)選(xuǎn)實(shí)驗，凍幹曲綫的優(yōu)化實(shí)驗(yàn)等。先選(xuǎn)擇種(zhǒng)類濃(nóng)度(dù)，再進(jìn)行優化組(zǔ)合(hé)。同樣組分的(dí)保(bǎo)護(hù)劑(jì)用在(zài)不(bù)同(tóng)的PCR反應體係(xì)可(kě)能凍(dòng)幹的曲綫，凍(dòng)幹的(dí)質量都會有差(chà)別(bié)，這是由(yóu)於(yú)本(běn)體物質不一樣(yàng)，實驗的條件(jiàn)也不*一(yī)樣，因(yīn)此(cǐ)對於凍幹沒有一個通(tōng)用的保護(hù)劑，需(xū)要針(zhēn)對自(zì)身(shēn)的反應體(tǐ)係進行開發(fā)。
叔丁醇(chún)是一種(zhǒng)特(tè)殊的(dí)凍(dòng)幹保(bǎo)護(hù)劑加速(sù)劑，可以(yǐ)起(qǐ)到(dào)凍幹保(bǎo)護(hù)劑，賦形劑和加(jiā)速劑的(dí)作用。如《一種凍幹添(tiān)加(jiā)劑及(jí)熒(yíng)光PCR反(fǎn)應(yīng)混合物(wù)幹粉 和(hé)製備(bèi)方法(fǎ)》所述(shù)加(jiā)入(rù)叔(shū)丁(dīng)醇做(zuò)保護劑(jì)的熒光(guāng)pcr反應體係的(dí)效率能大(dà)大(dà)提高，而(ér)且預凍溫度，升(shēng)華溫度，解(jiě)析溫度都能大大提高(gāo)，如(rú)作(zuò)者所述叔(shū)丁(dīng)醇在(zài)PCR試劑分裝(zhuāng)好準(zhǔn)備凍(dòng)幹之前按體積比(bǐ)加入(rù)， 混合(hé)後可(kě)提高混合(hé)物(wù)共(gòng)晶點15-20度，在凍(dòng)幹(gān)顯微(wēi)鏡下，叔丁醇升華後形成的微通道(dào)有利(lì)於(yú) 水分的析出(chū)，也加快了升華解析的速(sù)度。通過對(duì)保(bǎo)護劑(jì)的(dí)篩選(xuǎn)優(yōu)化，熒光PCR反應(yīng)混(hùn)合物(wù)含(hán)有(yǒu)凍幹添(tiān)加(jiā)劑(jì)，不僅擴增性(xìng)能好(hǎo)，又節省凍幹時(shí) 間(jiān)，顯著的(dí)優(yōu)點在於(yú)： 1，提(tí)高了(liǎo)共(gòng)晶點(diǎn)，預凍(dòng)溫(wēn)度(dù)從(cóng)常(cháng)見的(dí)-40℃～-30℃提(tí)高(gāo)到(dào)-15℃； 2，凍(dòng)幹時(shí)間僅需3小(xiǎo)時；3，凍(dòng)幹的成品(pǐn)在試劑(jì)管(guǎn)中形(xíng)態(tài)完整(zhěng)，晃(huǎng)動(dòng)不(bù)易碎； 4，凍幹組(zǔ)分復溶(róng)良好，並(bìng)且有(yǒu)良好的穩定(dìng)性。從以(yǐ)上(shàng)可以(yǐ)看(kàn)出經(jīng)過(guò)優(yōu)化(huà)的凍(dòng)幹(gān)保(bǎo)護劑(jì)和(hé)凍幹(gān)曲綫(xiàn)效率大(dà)大提高(gāo)，而對於常規(guī)的保(bǎo)護劑(jì)未(wèi)優化(huà)的保(bǎo)護劑和凍幹(gān)曲(qū)綫，一般的PCR反應(yīng)體(tǐ)係的(dí)凍幹(gān)時間在24小時，而(ér)經(jīng)過優化(huà)篩(shāi)選(xuǎn)後(hòu)效率可以大大提(tí)高(gāo)，而對於有(yǒu)的可能酶(méi)的凍存過程(chéng)中添(tiān)加了一(yī)定(dìng)的保(bǎo)護(hù)劑(jì)，保(bǎo)護(hù)劑濃(nóng)度合(hé)適可(kě)能(néng)不(bù)需要再(zài)添(tiān)加保(bǎo)護劑(jì)也可以很容易的凍(dòng)幹。凍幹保護劑(jì)屬於凍幹配方輔料的篩選(xuǎn)，對於很多物(wù)質的凍幹是*的。製藥和(hé)試劑(jì)凍幹基本(běn)上都需(xū)要添加(jiā)一(yī)種或(huò)者多(duō)種保(bǎo)護劑。
