多肽(tài)穩定(dìng)性(xìng)關於(yú)多肽(tài)的一(yī)個常見(jiàn)的誤解是(shì)多(duō)肽(tài)像(xiàng)蛋白質一樣(yàng)是(shì)不穩(wěn)定(dìng)的。事實上，多肽(tài)比(bǐ)蛋白質(zhì)穩(wěn)定得多，由(yóu)於兩個影(yǐng)響(xiǎng)蛋(dàn)白質穩定(dìng)性的要素不存在(zài)多肽合成中。這(zhè)兩(liǎng)個(gè)要素是第三次(cì)折(zhē)疊(dié)和(hé)蛋白酶的(dí)汙(wū)染。蛋白質很(hěn)容易(yì)變性，由(yóu)於(yú)它的三(sān)級構(gòu)造(zào)是由非(fēi)共(gòng)價鍵(jiàn)聯合(hé)的(dí)，例(lì)如靜電(diàn)互相(xiāng)作(zuò)用和疏水互(hù)相(xiāng)作用。多肽的長度和蛋白質(zhì)相(xiāng)比(bǐ)是(shì)很短(duǎn)；所(suǒ)以(yǐ)大多(duō)數肽沒有足(zú)夠量達到這種互(hù)相(xiāng)作用(yòng)使之(zhī)出現第三(sān)次折疊。故多肽不(bù)能像蛋白(bái)質一(yī)樣(yàng)變性(xìng)。多肽(tài)隻能(néng)經(jīng)過共(gòng)價(jià)修(xiū)飾或(huò)者肽鍵(jiàn)斷(duàn)裂被毀壞。不像蛋白(bái)質是從充溢(yì)各種(zhǒng)蛋白酶(méi)的細胞(bāo)裏(lǐ)被純(chún)化(huà)，合成的多(duō)肽被蛋白(bái)酶(méi)汙染(rǎn)的幾(jī)率(shuài)是很小(xiǎo)很小的。固拓生物(wù)在(zài)試驗(yàn)中(zhōng)發現在(zài)中性pH條件下，大(dà)多數生(shēng)物實驗(yàn)的停止(zhǐ)速度很慢(màn)。中性條(tiáo)件(jiàn)下細(xì)菌汙(wū)染可能是一(yī)個嚴(yán)重的(dí)問題（由於多肽(tài)是細菌的一種良(liáng)好的營養(yǎng)源(yuán)）。因(yīn)次，實驗(yàn)裏用(yòng)到(dào)的溶(róng)劑(jì)過(guò)濾比(bǐ)多肽的穩定更重(zhòng)要(yào)。在正(zhèng)常(cháng)條件下(xià)，多肽溶液在室(shì)溫下能保(bǎo)管幾(jī)天，在4度(dù)保(bǎo)管幾個(gè)星期(qī)和在-20度保(bǎo)管若(ruò)幹個(gè)月或更(gēng)多(duō)；凍幹(gān)的多(duō)肽粉末(mò)在(zài)室(shì)溫下能(néng)保(bǎo)管(guǎn)幾個月，在(zài)-80度(dù)下(xià)保管(guǎn)幾(jī)年。
多(duō)肽(tài)濃度(dù)準確測定多肽(tài)濃度比(bǐ)許多(duō)人(rén)預(yù)期的要(yào)復(fù)雜。事實上(shàng)，沒有一個(gè)簡單的通用辦法(fǎ)能(néng)用。稱(chēng)重和紫(zǐ)外(wài)綫吸收力是兩(liǎng)個(gè)常用(yòng)的辦法(fǎ)。a. 稱重。 它隻能提(tí)供(gōng)粗略估量(liáng)的多肽(tài)含量。多肽粉末(mò)是不(bù)容易處(chǔ)置的(dí)。要(yào)準確(què)稱(chēng)量少量(liáng)（<3毫克）是一個問題。另一個問題是(shì)，肽(tài)能(néng)夠含(hán)有各種含量的水和即(jí)便被(bèi)大(dà)範(fàn)圍凍幹後含(hán)有的較少水平的反離(lí)子。水(shuǐ)的(dí)的(dí)含量範(fàn)圍從約(yuē)5％至20％，有(yǒu)的(dí)以至(zhì)>40％。固(gù)拓(tuò)生物試驗(yàn)中，實(shí)計(jì)含量(liáng)取(qǔ)決於多肽(tài)序(xù)列(liè)。反離(lí)子(zǐ)的類(lèi)型和(hé)數(shù)量取決於(yú)用於多肽純化的溶劑和多肽序列。這(zhè)些水(shuǐ)分子(zǐ)產(chǎn)生的(dí)不肯(kěn)定(dìng)性是不能被疏(shū)忽。b. 紫(zǐ)外綫吸收(shōu)性。假(jiǎ)如您(nín)的多肽含(hán)有(yǒu)一個(gè)酪氨(ān)酸(suān)或(huò)色(sè)氨酸(suān)殘基，多肽的定量剖析就變得(dé)愈加簡(jiǎn)單(dān)。色氨(ān)酸在(zài)282 nm處的摩爾吸光(guāng)度(dù)[1 /（M *厘(lí)米(mǐ)）]是5700，酪氨(ān)酸在在275 nm處的摩(mó)爾吸光(guāng)度是1400。在0.1N的(dí)NaOH中(zhōng)，酪(lào)氨酸的-OH基團充沛去(qù)質子化(huà)。這(zhè)就使酪(lào)氨酸的(dí)吸收(shōu)峰(fēng)為(wéi)293納米。在此條(tiáo)件(jiàn)下(xià)，它的(dí)摩(mó)爾吸光(guāng)度增加到2400。值得關注(zhù)的(dí)是，假(jiǎ)如(rú)肽的側鏈(liàn)之間有互相作(zuò)用，紫(zǐ)外綫吸(xī)收率能夠(gòu)不同。這在小的親水性(xìng)肽，這(zhè)不是(shì)問題。在(zài)水溶液(yè)中(zhōng)，這些(xiē)肽通常(cháng)采用伸(shēn)展構象(xiàng)，一(yī)切(qiē)的(dí)側鏈(liàn)是完整(zhěng)暴(bào)露於(yú)溶(róng)劑中(zhōng)的(dí)。但(dàn)關於長的(dí)疏水性(xìng)多肽(tài)，固拓生(shēng)物試(shì)驗發(fā)現這種假(jiǎ)定(dìng)是不完整正確的(dí)。有時可(kě)察看(kàn)到低(dī)水平聚(jù)合和(hé)折疊。出(chū)於(yú)這(zhè)個(gè)緣由，我們(mén)以為，酪氨(ān)酸(suān)在0.1N NaOH中(zhōng)，在(zài)293 nm處的(dí)吸光度(dù)，由於(yú)在(zài)此條(tiáo)件(jiàn)下，肽是完整(zhěng)變(biàn)性(xìng)的(dí)。它的缺陷是，用於濃(nóng)度測(cè)定的樣品不(bù)能被恢(huī)復。假如(rú)您的肽不含有色氨(ān)酸或酪氨(ān)酸，精(jīng)確(què)理(lǐ)解肽(tài)的濃度(dù)是至(zhì)關(guān)重要的(dí)，合理的選擇是(shì)氨基酸定(dìng)量剖析。當然(rán)，這超出(chū)大(dà)多(duō)數(shù)實驗室的日常操作。基於上麵(miàn)的討論，為了(liǎo)多肽(tài)的(dí)濃度(dù)的(dí)準確測定(dìng)，我們激烈倡議(yì)在(zài)你(nǐ)的多肽(tài)的N-或(huò)C-末端(duān)添加一個酪(lào)氨(ān)酸(suān)殘(cán)基(jī)。
N-末端乙(yǐ)酰(xiān)化(huà)和的C-末端酰(xiān)胺化(huà)人們經常以為用乙酰基和酰(xiān)胺(àn)基分別阻(zǔ)斷(duàn)肽的兩端能(néng)增加(jiā)肽(tài)的穩定性，實踐上這(zhè)是(shì)不(bù)正確(què)的。大(dà)多(duō)數合(hé)成肽(tài)的序列(liè)都(dū)來源於(yú)蛋(dàn)白(bái)質(zhì)片段。在(zài)一(yī)個(gè)蛋白(bái)質(zhì)中，多肽序列(liè)的N末(mò)端(duān)和(hé)C末(mò)端構(gòu)成肽(tài)鍵。這(zhè)不同(tóng)於(yú)合(hé)成(chéng)肽含(hán)有(yǒu)不(bù)帶(dài)電(diàn)荷的(dí)兩端(duān)。帶(dài)電荷(hé)和不帶(dài)電(diàn)荷(hé)的(dí)多肽的(dí)物(wù)理(lǐ)化學性(xìng)質(zhì)是完(wán)整不同的(dí)，反(fǎn)過來這些性(xìng)質又影響多肽(tài)的功(gōng)用。經過(guò)乙(yǐ)酰基和酰(xiān)胺基分別N端(duān)和C端，這些(xiē)問(wèn)題能(néng)夠(gòu)被(bèi)處理，並且能(néng)夠(gòu)使(shǐ)合(hé)成(chéng)肽的兩端更(gēng)像(xiàng)肽(tài)鍵。由於這個緣由(yóu)，固(gù)拓生物(wù)用(yòng)於抗(kàng)體(tǐ)試(shì)驗(yàn)的(dí)多(duō)肽(tài)是末端的，除(chú)非(fēi)抗原(yuán)位於(yú)蛋白的末端(duān)。由於(yú)相同(tóng)的緣由，我(wǒ)們(mén)倡議顧客(kè)在(zài)停(tíng)止其它功用(yòng)性(xìng)研討時合成肽的(dí)兩(liǎng)端。沒有(yǒu)理(lǐ)論(lùn)支持有自(zì)在(zài)端的多肽(tài)是不(bù)穩(wěn)定的。
多(duō)肽溶解度當試圖(tú)將多(duō)肽(tài)溶解在(zài)執行(háng)多肽生(shēng)物(wù)功用的溶液(yè)中時，溶解度成為(wéi)關注的焦(jiāo)點(diǎn)。一(yī)切的多肽都能溶(róng)解在有機溶(róng)劑(jì)中。但(dàn)是這(zhè)並沒(méi)有多大(dà)的(dí)協助，由(yóu)於大(dà)多數(shù)肽(tài)的研(yán)討(tǎo)不(bù)能(néng)再有(yǒu)機溶劑(jì)中(zhōng)進行。肽(tài)的(dí)溶解度最終(zhōng)取決於它的(dí)序(xù)列(liè)。在能(néng)夠操作的(dí)條件(jiàn)，pH值可(kě)能(néng)是(shì)最重要的(dí)。固拓生物(wù)發現，在許(xǔ)多(duō)狀況(kuàng)下，改(gǎi)動(dòng)1-3個(gè)pH值單位能夠使十(shí)分(fēn)穩定(dìng)的多肽完整(zhěng)溶(róng)解。過渡(dù)曲綫通(tōng)常是(shì)很峻(jùn)峭的。在(zài)一個(gè)很(hěn)窄的(dí)pH範(fàn)圍(wéi)內(nèi)，溶(róng)液(yè)從(cóng)混(hùn)濁變得明(míng)澈(chè)。這可能(néng)是(shì)由於某(mǒu)些(xiē)殘(cán)基電離(lí)狀態的(dí)改動(dòng)，比方(fāng)His。還(huán)有另一個(gè)緣(yuán)由使(shǐ)pH值(zhí)調(tiáo)整變(biàn)得重(zhòng)要。由於(yú)用(yòng)於(yú)肽純化的(dí)HPLC溶(róng)劑含(hán)有0.1%的(dí)不能經(jīng)過(guò)凍幹(gān)除(chú)去(qù)的(dí)TFA，收(shōu)到的多肽(tài)通(tōng)常(cháng)含(hán)有少(shǎo)量的(dí)TFA。從而(ér)使得肽溶(róng)液(yè)比你預(yù)期的(dí)更具有(yǒu)酸性(xìng)。關(guān)於難以溶(róng)解的(dí)肽(tài)，你(nǐ)能(néng)夠(gòu)在有機溶(róng)劑中(zhōng)製備更高(gāo)濃度(dù)的(dí)原液，例(lì)如DMS，並且在生物功用檢測期間(jiān)稀釋肽(tài)。大多數的檢測(cè)能包(bāo)容1-2%的(dí)DSMO，一些(xiē)以(yǐ)至是5%。但(dàn)是這(zhè)並(bìng)不(bù)是總是起(qǐ)作用(yòng)的。一些肽(tài)當從(cóng)DMSO中(zhōng)稀釋(shì)時(shí)以至(zhì)在更(gēng)低濃度時(shí)匯(huì)集和沉澱(diàn)。
多肽凍(dòng)幹(gān)生產常見(jiàn)問題：活性(xìng)降低(dī)；含(hán)水(shuǐ)率(shuài)超標；形(xíng)態不良，變色(sè)，打(dǎ)粉(fěn)後(hòu)硬(yìng)度(dù)大(dà)等(děng)。
多(duō)肽凍(dòng)幹(gān)常見(jiàn)問題(tí)：品種(zhǒng)多(duō)，保(bǎo)護劑(jì)及賦(fù)型劑(jì)難以準(zhǔn)確(què)匹(pǐ)配(pèi)。
多(duō)肽(tài)凍幹(gān)常見問題：容易(yì)交叉汙染(rǎn)，純(chún)度(dù)降低。
多(duō)肽(tài)凍(dòng)幹(gān)常見(jiàn)問題(tí)：生產效(xiào)率低(dī)，產能(néng)低，能耗高。
多(duō)肽凍幹機常(cháng)見問(wèn)題：凍幹機與(yǔ)產綫匹配(pèi)問題，凍幹機柔性問題。
