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膠(jiāo)體金(jīn)凍(dòng)幹製(zhì)品的製備(bèi)方法示例(lì)說明

更(gēng)新時(shí)間(jiān):2020-06-11 點擊次數:4099

免疫(yì)膠體金作(zuò)為標記物用於免疫電鏡技術是一(yī)種新的免(miǎn)疫(yì)學(xué)方(fāng)法(fǎ)。免(miǎn)疫膠(jiāo)體金技術(shù)(Immune colloidal gold technique) 是以膠(jiāo)體金作為(wéi)示蹤標誌物應用於抗(kàng)原(yuán)抗體的一(yī)種(zhǒng)新(xīn)型的(dí)免疫標記(jì)技術,英文縮(suō)寫(xiě)為:GICT。膠體金(jīn)是由氯(lǜ)金(jīn)酸(suān)(HAuCl4)在(zài)還(huán)原劑(jì)白磷(lín),抗壞血(xiě)酸,枸(jǔ)櫞酸(suān)鈉,鞣(róu)酸等(děng)作用(yòng)下(xià),聚合(hé)成(chéng)為特定(dìng)大小的(dí)金顆(kē)粒,並(bìng)由(yóu)於靜電(diàn)作用成為(wéi)一(yī)種穩定的膠體狀(zhuàng)態(tài),稱(chēng)為(wéi)膠(jiāo)體(tǐ)金。膠(jiāo)體金顆粒(lì)對蛋(dàn)白(bái)質有很強(qiáng)的(dí)吸(xī)附(fù)能(néng)力,可(kě)以與葡萄(táo)球菌A蛋白,免(miǎn)疫(yì)球(qiú)蛋白(bái), 毒素(sù),糖(táng)蛋白,酶,激素,病(bìng)毒或(huò)細菌(jūn)抗(kàng)原等非(fēi)共價結合(hé),形(xíng)成(chéng)免疫膠體(tǐ) 金(jīn)綴合物,用(yòng)於免(miǎn)疫檢測。

免(miǎn)疫(yì)膠體金(jīn)常用的穩(wěn)定劑(jì)(保護(hù)劑)對(duì)免疫(yì)膠(jiāo)體(tǐ)金的穩定(dìng)性非常(cháng)重要(yào),國內外常應用(yòng)的各(gè) 種(zhǒng)穩定(dìng)劑:牛(niú)血(xiě)清白(bái)蛋白(bái)(BSA),葡聚糖(táng)(Dextran),聚(jù)乙(yǐ)二醇20000(PEG), 明膠(gelatin)。目前普遍使用(yòng)聚(jù)乙(yǐ)二醇20000(PEG)作(zuò)為(wéi)穩定(dìng)劑。

免疫膠體金定(dìng)性檢測(cè)因其快速,簡便,在醫(yī)院檢(jiǎn)驗科已(yǐ)廣泛應(yīng)用(yòng),用(yòng)於(yú)妊娠(shēn)早期診(zhěn)斷的(dí)人絨毛膜促性(xìng)腺激(jī)素(HCG)膠(jiāo)體金(jīn)法(fǎ)診(zhěn)斷試劑製(zhì)造及(jí)檢定(dìng)規(guī)程已由(yóu)中(zhōng)國生(shēng)物(wù)製(zhì)品(pǐn)規(guī)程(chéng)公(gōng)布。免疫膠(jiāo)體金技術常(cháng)用(yòng)於定性(xìng)檢測微生物感染(rǎn),檢測血清(qīng)抗體,檢測(cè)血(xiě)清(qīng)C-反(fǎn)應(yīng)蛋白C RP等。

免(miǎn)疫(yì)膠(jiāo)體(tǐ)金(jīn)技(jì)術快速又(yòu)簡便,所以廣(guǎng)受歡迎,但要測定(dìng)結果非常準確(què), 則(zé)免疫膠(jiāo)體(tǐ)金必須(xū)有(yǒu)好的(dí)穩定(dìng)性,這(zhè)在免疫(yì)膠(jiāo)體(tǐ)金(jīn)定量檢測(cè)中尤(yóu)為重(zhòng)要, 是發(fā)展金(jīn)標法(fǎ)快速定(dìng)量(liáng)檢測試劑(jì)的(dí)前(qián)提(tí)。

生物(wù)製(zhì)品(pǐn)凍(dòng)幹形式可(kě)以采(cǎi)用常(cháng)溫(wēn)運輸和儲存,保存(cún)期(qī)長,大大降(jiàng)低低(dī)溫保存不當帶(dài)來(lái)的失效(xiào)變性等(děng),而且凍(dòng)幹後試(shì)劑(jì)穩定性(xìng)好。因此(cǐ)采(cǎi)用凍(dòng)幹法可以(yǐ)製備(bèi)製(zhì)備膠體(tǐ)金(jīn)凍幹品,化(huà)學(xué)發光凍幹品,熒(yíng)光PCR凍幹品等。凍(dòng)幹(gān)法(fǎ)已(yǐ)經在(zài)診斷試(shì)劑(jì)行(háng)業(yè)正在崛(jué)起。

那麼凍幹(gān)膠體金製品和凍幹PCR試劑或者其(qí)他(tā)凍(dòng)幹其(qí)實都(dū)是(shì)相似的原理,主要步驟如下(xià):

1.製(zhì)備抗體包(bāo)被膠(jiāo)體金

2.製(zhì)備(bèi)膠(jiāo)體(tǐ)金溶液:膠體金溶(róng)液包(bāo)含了穩定劑(jì),保(bǎo)護劑,緩衝液(yè)等(děng)。膠體金溶液(yè)的配置(zhì)是(shì)非常關鍵(jiàn)的,如(rú)果配(pèi)置的保護劑選(xuǎn)擇不當或者(zhě)溶度不合(hé)適(shì),可(kě)能在(zài)凍(dòng)幹過程中會發生(shēng)破乳(rǔ)現象(xiàng),嚴重的破乳會造成肉眼可(kě)見的(dí)顆粒(lì)凝(níng)聚。輕度(dù)的(dí)破(pò)乳引(yǐn)起的微量(liáng)顆(kē)粒凝聚, 在檢測(cè)過(guò)程中因(yīn)直徑(jìng)增(zēng)大而(ér)通(tōng)不過(guò)微孔(kǒng)纖(xiān)維膜,滯留在膜上(shàng)的(dí)紅(hóng)色凝(níng)聚顆 粒(lì)就(jiù)誤報為假陽性的(dí)結果(guǒ)。

3.製(zhì)備(bèi)膠(jiāo)體金凍(dòng)幹品:製備凍(dòng)幹(gān)品(pǐn)的(dí)凍幹(gān)工藝曲(qū)綫可以優(yōu)化(huà)。在控製風險(xiǎn),獲得優(yōu)質凍(dòng)幹(gān)品的(dí)同時優(yōu)化工藝(yì)曲(qū)綫(xiàn),可(kě)以(yǐ)節省凍幹時間,降(jiàng)低(dī)成(chéng)本(běn)。

   所有(yǒu)的凍幹(gān)製品(pǐn)的開(kāi)發工藝(yì)基本上是(shì)一致的主(zhǔ)要(yào)包含(hán)凍(dòng)幹配(pèi)方篩選(xuǎn)也就是保(bǎo)護劑(jì)的(dí)篩選(xuǎn),其次(cì)是凍幹曲綫工(gōng)藝優化(huà)。

 

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